巨核细胞的免疫学研究

巨核细胞的免疫学作用鲜被研究 ,本研究观察巨核细胞的粘附分子和细胞因子表达 ,以及细胞因子与巨核细胞的相互作用 ,以了解巨核细胞的免疫学作用。使用流式细胞术 ,ELISA和免疫组化方法 ,分析粘附分子CD36在血小板、骨髓巨核细胞和巨核细胞株 (Meg 0 1,Dami,CHRF 2 88 11和M 0 7e)的表达 ;使用RT PCR方法 ,检测白细胞介素 1(IL 1)至白细胞介素 10 (IL 10 ) ,TNF α ,TNF γ和IFN γ在 4个巨核细胞株的表达 ;使用血浆凝块巨核细胞集落培养方法 ,观察细胞因子IL 1β ,IL 3,IL 6和TPO对小鼠巨核细胞生长的影响 ,乙酰胆碱酯酶染色鉴定和识别巨核细胞。结果 :①血小板、骨髓巨核细胞和巨核细胞株均表达CD36 ,而且随着细胞的发育成熟 ,CD36表达越来越高 ,提示巨核细胞通过合成血小板膜上的粘附蛋白参与免疫反应 ;② 4个巨核细胞株代表不同成熟阶段巨核细胞的模型 ,炎性细胞因子TNF α ,IL 1β ,IL 3和IL 6在 4个细胞株均有表达 ,提示不同阶段的巨核细胞均可作为炎性细胞因子的一个来源 ,参与机体的免疫过程 ;③细胞因子IL 1β ,IL 3和IL 6对巨核细胞生长均有不同程度的促进活性 ,尽管较血小板生成素低 ,仍提示巨核细胞存在一个自分泌 (autocrine)反应 ,影响自身的生长。研究结论提示巨核细胞可

人CD40-Ig融合蛋白表达载体的构建及其在COS-7细胞的表达

CD4 0 /CD4 0L途径是除B7/CD2 8途径之外的重要的共刺激信号转导途径 ,在T细胞活化过程中扮演着十分关键的角色。因而 ,该途径可能在同种移植排斥的诱导和效应阶段的不同时期发挥关键作用。本研究旨在获得人CD4 0分子胞外区和人IgG 1Fc段的融合蛋白 ,以探索阻断CD4 0 /CD4 0L共刺激途径在免疫治疗中的潜在应用。首先 ,从人B淋巴瘤细胞系Daudi中提取细胞总RNA ,利用RT PCR技术扩增人CD4 0分子胞外区基因 ,将扩增产物连接入pGEMTEasy载体中构建克隆载体 pGE4 0 ,利用全自动DNA测序仪进行序列测定。将测序正确的胞外区片段插入至含人IgG 1类抗体重链基因组序列的 pIG 1载体中构建瞬时表达载体 ,命名为 pIG/ 4 0Ig。用DEAE Dextran/Chloroquine法转染COS 7细胞 ,夹心ELISA法和Western印迹分析鉴定培养上清中CD4 0 Ig融合蛋白的表达及免疫学活性。在重组载体 pIG/ 4 0Ig转染COS 7细胞后 ,ELISA法检测到细胞培养上清中有融合蛋白的表达 ;Western印迹鉴定发现在相对分子量 5 0kD左右有一特异条带 ,该分子可同时被抗人CD4 0单抗G2 8 5和抗人Igγ链的单抗识别。本研究成功地扩增人CD4 0基因并构建了人CD4 0 Ig融合基因表达载体 ,在C0S 7细胞中获得功能性表达 ,为进一步研究CD4 0 /CD4 0L途径在移植物抗宿主

重组人白细胞介素11对正常及骨髓抑制小鼠的促血小板生成作用

本试验的目的是观察国产重组人白细胞介素 11(rhIL 11)皮下注射对正常小鼠和骨髓抑制小鼠的血液学效应。给正常小鼠rhIL 112 0 0及 4 0 0 μg/kg皮下注射 ,连续 7天 ,第 5天时外周血血小板数轻度升高 ,起效较平缓 ,停药后血小板数可在 4天内恢复到给药前水平。对骨髓抑制小鼠 ,rhIL 11的治疗可明显地减轻外周血小板计数的下降程度 ,促进血小板计数的恢复。rhIL 11在每天 10 0 - 4 0 0 μg/kg时对骨髓抑制小鼠均有良好疗效 ,治疗 13- 15天血小板计数恢复到照射前水平 ,在每天 4 0 0 μg/kg时起效稍快于 10 0及 2 0 0 μg/kg。上述 3个剂量所引起的血小板最大升幅十分接近。rhIL 11的升血小板作用与其促进骨髓巨核系祖细胞的增殖与成熟有关。上述结果表明 ,rhIL 11治疗无论对正常小鼠还是骨髓抑制小鼠均可提高外周血血小板数 ,提示rhIL 11可能是一种治疗血小板减少症的药物。

重组人白细胞介素11对卡铂所致猴血小板减少症的治疗作用

用卡铂建立的猴骨髓抑制模型观察国产重组人白细胞介素 11(rhIL 11)对血小板减少症的治疗作用。给予模型动物rhIL 115 0或 10 0 μg/kg皮下注射 ,连续 19天。给rhIL 11治疗的猴血小板计数从第 8天开始下降 ,在第 12 - 14天达最低点 ,其下降程度远低于模型动物。rhIL 11治疗后 11- 13天血小板计数开始回升 ,13- 15天达到或超过建立模型前水平 ,停药后血小板数继续升高 ,并维持在高水平。停药 4天后血小板计数开始回落。实验结果证实rhIL 11具有显著的促血小板生成的作用 ,不仅可以缩短卡铂引起的血小板减少症的持续时间 ,而且可以减轻血小板减少症的严重程度。结论提示rhIL 11可作为治疗化疗引起的血小板减少症的有效药物。

甲氨蝶呤对单核细胞样细胞系U937的生长影响及其促凋亡作用

一般认为急性髓细胞白血病 (AML)是对甲氨蝶呤 (MTX)原发耐药的恶性肿瘤。AML细胞除急性单核细胞白血病 (AML M5)细胞与MTX孵育时 ,由于不能象急性淋巴细胞白血病 (ALL)细胞一样形成足够量的长链聚谷氨酸盐甲氨蝶呤 (MTXPG) ,而被认为对MTX不敏感。为了开发对AML M5新的治疗 ,本实验采用了具有单核细胞特征的U937细胞系进行研究。细胞分别通过不同浓度 (1nmol/L - 10 0 μmol/L)MTX孵育 2 4小时或 4 8小时后 ,通过XTT法评估细胞生长抑制情况。 2 4小时的半数抑制浓度 (IC50 )为 0 .0 4 μmol/L ;4 8小时的IC50 为 0 .0 37μmol/L ,90 %细胞抑制浓度 (IC90 )为 0 .39μmol/L。为了解MTX细胞毒作用的发生机制 ,进一步分析了细胞的死亡过程。采用了系列实验 ,包括台盼蓝拒染法、流式细胞术、显微镜 (瑞氏染色法 )及DNA片段分析进行研究。结果在MTX作用后短时间内 (4或 6小时 )无明显的细胞凋亡特征出现。随 5nmol/L- 10 μmol/LMTX作用 8小时后 ,亚G1(凋亡 )峰的比率从 0 .1μmol/L的 3 2 %增加到 5 0 μmol/L的 18 2 %,S期的比率从 0 0 1μmol/L的 4 1 2 %到 10 μmol/L的 19 1%。可见到DNA片段电泳后细胞凋亡的特征性改变。MTX所引发U937细胞的生长阻滞和凋亡特征 ,提示它可用于AML M5治疗的潜在

人脐血移植的裸鼠模型

采用BALB/cnu+裸鼠 ,建立脐血移植的裸鼠模型 ,探讨分离、冻存后的脐血造血细胞在小鼠体内的造血活性及进入体内后的迁移、定居规律 ,为临床移植及大规模建立脐血库作准备。结果显示羟乙基淀粉沉降法分离及以DMSO为保护剂的阶段降温法冻存脐血造血细胞回收率高 ,活力好 ,每只小鼠输入 (1.0 - 2 .0 )× 10 7个脐血单个核细胞 ,就能在其体内查到成活的证据。结果表明 :①羟乙基淀粉沉降法和以DMSO为保护剂的阶段降温法能有效地回收脐血造血细胞和保持其造血活性 ,在临床移植和建立脐血库时可以采用。②人类脐血富含造血干细胞 ,能跨越种属障碍 ,在裸鼠体内移植成活。③脐血造血细胞进入裸鼠体内后 ,先散布于骨髓、肝、脾、肺、肾等脏器间 ,最后定居于骨髓。冻存可能影响造血细胞表面粘附分子 ,影响其定居行为 ,但并不影响其造血活性。

骨髓间充质干细胞的研究前景

除造血干细胞以外 ,骨髓中还含有另一类干细胞 ,被称为间充质干细胞 (mesenchymalstemcell ,MSC)。在不同的诱导条件下 ,这类细胞可分化为多种造血以外组织特别是中胚层和神经外胚层来源的组织细胞 ,如成骨细胞、成软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞和星形神经胶质细胞等。骨髓间充质干细胞易于分离和培养扩增 ,还易于外源基因的导入和表达 ,有望成为一种新的细胞治疗和基因治疗的靶细胞 ,在多种造血以外组织的缺陷性疾病、退行性疾病和遗传性疾病的细胞治疗和基因治疗中具有重要的应用前景。

骨髓增生异常综合征基因缺陷的研究

骨髓增生异常综合征是一种造血干细胞克隆异常性疾病。近代分子遗传学的发展使我们对其分子水平上的形成机制有了进一步的了解。本文主要从原癌基因的异常表达、肿瘤抑制基因表达的缺失和DNA修复机制的异常等方面概括地论述了骨髓增生异常综合征基因缺陷的研究进展。

白血病患者骨髓基质细胞上清TNF-α含量的测定